植物DNA 提取技術介紹 （DNeasy Plant Mini Kit）
簡介：
從植物細胞、組織或真菌細胞樣本中分離總DNA，產量可達30 μg
1.高純度DNA，無污染物和酶抑制劑
2.快速純化得到即用型DNA
3.無需有機抽提，無需乙醇沉淀
DNeasy Plant Mini Kit通過基于硅膠膜的離心柱形式，可快速便捷的純化DNA。常規產量為3–30 μg高品質DNA，產量取決于樣本來源。DNeasy Plant Mini Kit的DNA純化過程可在QIAcube全自動核酸純化儀上自動化進行。
詳細信息：
性能
DNeasy Plant Maxi Kit可快速高效的純化高品質DNA，可以從不同種類的植物和組織樣本中進行純化，包括較難處理的樣本來源（參見"Selection of plant species processed with DNeasy Kits"）。樣本可以是新鮮、冷凍或者風干的。優化的DNeasy Plant操作流程與QIAshredder Maxi離心柱結合使用，獨特的過濾和勻質柱，能夠有效的去除細胞碎片并且優化裂解后的樣本處理流程。
用DNeasy Kits處理的植物種類簡表
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Abies alba（銀杉） |
Nicotiana tabacum（煙草） |
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Aesculus hippocastanum（七葉樹） |
Oryza sativa（水稻）4 |
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Arabidopsis thaliana（擬南芥） |
Pelargonium sp.（天竺葵）4 |
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Avena sp.（燕麥） |
Petunia sp.4 |
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Brassica napus（油菜） |
Pinus sylvestris（歐洲赤松），P. brutia5 |
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Brassica oleracea（大頭菜） |
Populus tremula（白楊） |
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Chicorium endivia（菊苣） |
Pseudotsuga menziesii（Douglas 冷杉） |
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Citrullini lanatus（西瓜） |
Quercus robur, Q. petrea（橡樹）6,7 |
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Egeria sp. |
Rhododendron sp.2,4 |
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Fagus sylvatica（櫸木）1 |
Rubus idaeus（覆盆子） |
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Helianthus spp.（向日葵） |
Solanum tuberosum（土豆） |
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Hordeum vulgare（大麥）2 |
Sphagnum palustre（苔） |
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Humulus sp.（酒花） |
Spinacia oleracea（菠菜） |
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Hydrilla sp. |
Taxus baccata（紅豆杉） |
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Kalanchoe spp. |
Triticum aestivum（小麥）4 |
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Lupinus sp. |
Ulmus glabra（榆樹）6 |
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Lycopersicon esculentum（番茄）3 |
Vitis spp.（葡萄）6 |
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Myriophyllum sp. |
Zea mays（玉米） |
幼葉或針葉（以及其他組織，如上）收集并立即速凍。使用DNeasy Plant Mini Kit進行DNA提取。1山毛櫸、2干葉、3愈傷組織、4年植物上的葉子、5胚乳、6富含碳水化合物的老樹葉、7芽。包括真菌在內的其他物種的DNA提取的詳細信息，請聯系QIAGEN公司的技術支持或當地的經銷商。
常規產量為3–30 μg，樣本量達100 mg濕重，洗脫體積為50–400 μl。DNA產量因種類和組織的不同而不同，取決于基因組大小、倍體、細胞數量和組織樣本的年齡。較低和較高的范圍值分別對應擬南芥和小麥。
DNeasy Plant操作流程制備純核酸，無多糖和其他使用常規方法純化產生的次生代謝產物。這些雜質可能會干擾分光讀數并抑制酶反應。DNeasy純化的DNA的吸光度掃描在260 nm處顯示對稱峰，證明DNA無酶抑制劑等雜質。DNeasy純化的DNA最長為40 kb。純化的DNA可用于多種應用。
原理
DNeasy Plant Kits使用先進的硅膠膜技術和簡單的離心操作流程從植物組織和細胞或者真菌中提取高純度的細胞總DNA。DNeasy技術取代繁瑣的DNA提取操作流程，如十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）、苯酚或者氯仿萃取。使用DNeasy操作流程不需要乙醇沉淀，純化的DNA可以直接使用。DNeasy樣本制備技術已經過認證。
操作流程
首先對樣本進行機械攪拌，然后進行化學裂解。在裂解過程中，RNA被RNAase消化去除。細胞碎片、沉淀的蛋白質和多糖都被去除，并且樣本通過QIAshredder Maxi離心柱并離心實現勻漿。調節緩沖溶液條件，并將裂解產物上樣到DNeasy Plant Maxi離心柱中。在短暫的離心過程中，DNA選擇性結合到硅膠膜上，污染物通過。余下的污染物和酶抑制劑經過一或者兩步高效的洗滌步驟去除。然后，用水或者低鹽緩沖溶液將純化的DNA洗脫，待用。
應用
DNeasy Plant Mini Kit適用于從植物組織中純化DNA，包括：
植物細胞
植物組織
真菌
技術參數：
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特點 |
參數 |
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Applications |
PCR, real-time PCR, blotting |
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Elution volume |
50–400 μl |
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Format |
Spin column |
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Main sample type |
Plant samples |
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Processing |
Manual |
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Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein |
DNA |
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Sample amount |
<100 mg |
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Technology |
Silica technology |
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Time per run or per prep |
<1 hour |
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Yield |
3–30 μg |
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